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贝类育苗单胞藻培养技术

2019-08-04 19:52 来源: 震仪

  2013.614饲料与添加剂 辽东学院农学院 罗永成贝类育苗单胞藻培养技术随着贝类人工育苗技术的发展,单胞藻饵料的培育已成为育苗过程中的关键技术。在贝类人工育苗过程中,需要培养大量的优质单胞藻作为幼体贝的饵料。单胞藻培养的好坏,直接影响育苗的成败。一、一级培养(保种室)1.培养设施 为在贝类人工育苗季节保存高纯度的优质藻种,育苗厂应具备专用的保种室,其面积大小依据规模而定。保种室四面用玻璃窗采光,并加装人工光源,以备阴雨天光线不足时使用。若是透明玻璃钢瓦屋顶的保种室,则在夏季高温时,会因光线太强和室温过高而抑制单胞藻生长,甚至“ 烫死” 单胞藻,因此屋顶应设遮光设施。室内应配有温度计,保种常用5000毫升三角烧瓶,用煮沸过滤海水。保种室应储备以下用品,酒精棉、脱脂棉、筛绢网(300目)、显微镜、滤纸等器材,另在保种室旁配置专门的配药房,面积根据实际情况而定,保持配药房整洁干净。2.培养条件 保种时每天需摇瓶3~4次,防止菌膜产生。培养架上安装日光灯做光源,以备自然光不足时补充,强光照射用白窗帘遮光。保种室的温度应控制在单胞藻的适温范围内,一般在北方应具备升温设施,使硅藻保持在16~18℃,金藻保持在20~22℃。3.培养方法和步骤 培养容器内外先用稀HC剂清洗,再用淡水冲洗。用300目的筛绢网把脱脂棉包裹在内过滤海水,然后用淡水冲去瓶外的生海水,放在电炉上加热消毒,海水煮沸后停5分钟至水泡消失,然后再加热煮沸,至水泡消失。这样对细菌和原生动物的杀灭比较彻底,冷却备用。4.营养盐 金藻、硅藻营养盐配方:分别配制甲液和乙液,然后按比例进行混合后使用。甲液配方:三氯化铁6克、氯化锰1.5克、硼酸150克、钠盐220克、硝酸钠500克、硫酸二氢钠200克、微量金属溶液5毫升、蒸馏水5000毫升;乙液配方(微量金属溶液):氯化锌4克、氯化钴3克、钼酸铵1.5克、硫酸铜1.5克、蒸馏水200毫升。将消毒冷却后的甲液与乙液按100∶1的比例混合,如果培育金藻每1000毫升营养液需加入维生素B1(0.1克/支)和维生素B12(0.5毫克/支)各一支。在硅藻培养过程中不需加维生素。配好的营养盐按每升海水加1毫升营养盐的比例在培养前进行添加即可。扁藻营养盐配方:NH4NO3300克、尿素90克、KH2PO420克、柠檬酸铁铵2.25克、淡水5000毫升,消毒方法和使用量同上。5.接种 选择颜色正常,处于指数生长期、镜检无污染的藻种,硅藻接种前加入氯霉素。6.注意事项 硅藻控制在16~18℃之间,金藻20~22℃之间。进入保种室需更换专用衣服和鞋,操作前用香皂洗手,然后用酒精棉擦手。摇瓶时,切勿将藻种摇出,更换操作品种应重新洗手并消毒。保持室内卫生,非工作人员尽量不要进入保种室。接种后要标明接种日期、品种,以便按接种顺序接2级培养池。接种的藻种已污染或老化的藻种不能接种应及时处理。二、二级培养1.培养条件 单胞藻生产培养需要大量的优质纯种,用于不断接种三级大池,所以要对一级藻种进一步扩种培养。常用的容器有白塑料桶(50升)、细口瓶(20升),二级小池[(400~450)厘米× (150~200厘米)× (70~80厘米)]。以自然光为光源,光照强时用白布遮光,冬季气温低时用暖气升温,高温季节开窗通风降温。细口瓶采用连续充气的培养方式。2.培养方法 ①清洗。塑料桶用含有40× 10-6有效氯的次氯酸钠消毒水清洗,用消毒海棉将内外擦洗干净,包括搅拌工具,然后将搅耙放入消毒池中浸泡。细口瓶用稀盐酸将瓶内外清洗干净,用淡水冲3遍(方法同保种室)。二级小池用含有40× 10-6有效氯的次氯酸钠消毒水,用消毒海棉擦池台、池壁、池底,然后用消毒水冲洗2~3遍。②海水的消毒。塑料桶刷干净后,注入海水,用含有40× 10-6有效氯的次氯酸钠消毒水浸泡12小时以上。③细口瓶用三级池中已知次 2013.615饲料与添加剂氯酸钠含量的消毒水注满浸泡12小时以上,放入气泡石及充气管。④将二级小池中注满已知次氯酸钠含量的消毒水浸泡12小时以上。3.中和 次日在白塑料桶中注入硫代硫酸钠中和次氯酸钠,用碘化钾+淀粉试剂测余氯呈无色后即可(10%碘化钾:100毫升水+10克碘化钾;0.5%淀粉:1000毫升水+0.5克淀粉)。 4.营养盐 氮元素:1000毫升淡水+30克硝酸钠;磷元素:1000毫升淡水+ 10克磷酸二氢钾;硅元素:1000毫升淡水+10克硅酸钠(NaSiO3),仅用于硅藻;铁元素:1000毫升淡水+2克柠檬酸铁铵;维生素B1、维生素B12,直接使用,仅用于金藻。在配置过程中,硅元素单独加入池中,如果与其他元素放在一起加入池中,能形成絮状物,不易搅开。使用剂量,硅元素25毫升/20升,磷元素25毫升/20升,氮元素25毫升/20升(硅藻)、50毫升/20升(金藻),铁元素2.5毫升/20升,每20升海水维生素B1、维生素B12各一支。5.接种 选择处于指数生长期无污染的培养瓶藻种,接种剂量1~2瓶/20升。三、三级培养1.培养设施及条件 培养池为有效利用深度小于1米的水泥池,培养池水深尽量不要大于1米,容量为8~10吨。2.培养方法�培养池的消毒:取2000毫升高浓度的次氯酸钠溶液,先擦池台再擦池壁,用刷子刷池底,用消毒海水把搅拌工具擦干净,池塞儿在桶中浸泡,用消毒水将四壁冲洗2~3次,把水扫出塞严,加海水满池。培养用水:在沉淀池中加次氯酸钠溶液经24小时以上沉淀,最好是黑暗沉淀。24小时后加入硫代硫酸钠中和,硫代硫酸钠的量与次氯酸钠的量成正比,同二级培养。3.营养盐�硅藻。氮元素:1000毫升淡水+150克硝酸钠,磷元素:1000毫升淡水+50克磷酸二氢钾,铁元素:1000毫升淡水+10克柠檬酸铁铵,硅元素:1000毫升淡水+50克硅酸钠。金藻。磷元素、铁元素、硅元素用量同硅藻,氮元素双倍加入,维生素B10.1克/吨,维生素B120.5毫克/吨。扁藻。氮元素:4000毫升淡水+2400克硝酸铵,用开水融化;磷元素、铁元素与金藻、硅藻一样。4.接种 选择无污染,颜色正常,处于指数生长期的二级藻种扩入三级培养池中,或选择在三级培养池中生长好的进行分池培养。四、培养管理1.镜检 每日上午镜检,及时检查有无污染,发现问题及时处理。2.观察 经常用肉眼观察藻液颜色是否正常,运动种类及上浮情况,有无沉淀,气味是否异常等。3.扁藻培养 经常给扁藻打沫,用搅耙把沫子赶到一个角,用水舀舀出。扁藻生长比较快,一般上午8~9时效果较好。在藻类刚接种时,经常搅池防止扁藻下沉。4.搅池 搅池时先搅二级小池,先搅金藻再搅硅藻,最后搅扁藻。每搅一种藻类时,用酒精棉消毒手一次,搅池时要小心,不能把池中的单胞藻搅出来,或溅到另一个池中,以免造成污染,尤其是搅扁藻特别小心,扁藻的生命力顽强,生长繁殖也迅速,搅拌工具专池专用。5.投饵 选取生长好的池子投饵,无原生动物的投给幼体。投饵后,管头要用消毒海棉消毒,防止污染。扁藻投饵的池子不能再接种,金藻接种前先投氯霉素2克/吨。五、污染处理措施在贝类人工育苗过程中需要大量的金藻,由于金藻是高温品种需要的水温高,敌害生物多且繁殖快,若在单胞藻接种和培养过程中操作不慎,就会引起污染。目前还没有能有效杀灭敌害生物而不影响单胞藻生长的药物与措施,只能以预防为主。培养容器、培养池、工具等必须严格消毒,防止污染。必须通过封闭式保种与扩种为连续三级生产性培养提供足够的优质纯种。只要藻种充足、不被污染,即使三级生产性培养中有污染发生,也可通过投喂,用 盐 酸 酸 化 处 理 的 办 法 得 到 恢复。保持培养池中单胞藻良好的生长优势和数量优势,抑制敌害生物的繁殖生长,使单胞藻在长势及数量上占绝对优势,从而对敌害生物起到有效的抑制作用。在培养单胞藻的过程中,出现敌害生物可进行酸化处理。一般金藻用盐酸酸化,一般7~8吨池子用盐酸6000毫升酸化,氢氧化钠2700克中和。在加盐酸时,边加边搅池,以免对藻类杀伤太大。加氢氧化钠用同样方法,通常在下午2时酸化,晚上8时中和。如果是硅藻出现原生动物,不能酸化且马上投喂;如果原生动物数量太多,用次氯酸钠杀死(1小时)后弃去,培养池必须进行彻底消毒。总之,单胞藻的培养有很强的连续性,从保种到扩种到三级生产性培养,每个环节都必须谨慎操作,严格管理,特别是要抓好保种与扩种工作,为后续三级培养储备充足的优质纯种。“ 勤、细、巧”是做好单胞藻培养工作的关键,“ 勤” 即是勤观察、勤镜检,及时发现问题;“ 细” 是工作中仔细认真,消毒彻底,操作严格,杜绝混种,减少污染;“ 巧” 是巧安排,根据气温变化和生产需要安排培养种类,调整培养水体。

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